Th1/2/9/17/22亞群檢測(cè)
Th1/2/9/17/22亞群檢測(cè),我們常用的檢測(cè)指標(biāo):CD4、IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A、IL-22。
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實(shí)驗(yàn)介紹
【技術(shù)原理】
流式利用不同熒光物質(zhì)標(biāo)記的單克隆抗體,與待測(cè)成分作用,然后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)待測(cè)細(xì)胞。待測(cè)細(xì)胞隨流動(dòng)室內(nèi)的流動(dòng)鞘液排列成單列,一個(gè)個(gè)迅速通過(guò)激光聚焦區(qū),激光在對(duì)每個(gè)細(xì)胞進(jìn)行照射時(shí)可同時(shí)得到前向角散射和側(cè)向角散射2種散射光以及激發(fā)熒光標(biāo)記物發(fā)出的信號(hào),利用這些信號(hào),可計(jì)算出相對(duì)含量,從而得到細(xì)胞群的相對(duì)比值。
Th1細(xì)胞是IFN-γ+ IL-12極化的T輔助細(xì)胞,可驅(qū)動(dòng)巨噬細(xì)胞的殺滅作用和對(duì)病原體的殺傷作用。它們的特征在于轉(zhuǎn)錄因子T-bet的表達(dá),并產(chǎn)生細(xì)胞因子:IL-2,IFN-γ和TNF。
Th2細(xì)胞是IL-4極化的T輔助細(xì)胞,可刺激對(duì)感染的體液反應(yīng),包括B細(xì)胞增殖,類別轉(zhuǎn)換和抗體產(chǎn)生增加。它們的特征在于轉(zhuǎn)錄因子GATA3的表達(dá)并產(chǎn)生細(xì)胞因子:IL-4,IL-5,IL-6,IL-10和IL-13。
Th9細(xì)胞是最近表征的T輔助細(xì)胞的子集,在預(yù)防細(xì)胞外寄生蟲(chóng)(尤其是線蟲(chóng))中發(fā)揮作用。Th9細(xì)胞通過(guò)IL-4和TGF-β從幼稚細(xì)胞極化。盡管它們與Th2不同,但Th9細(xì)胞可以通過(guò)TGF-β的作用從Th2細(xì)胞衍生而來(lái)。盡管產(chǎn)生抗炎性IL-10,它們?nèi)耘c炎性疾病如過(guò)敏性炎癥相關(guān)。
Th17細(xì)胞是活化T輔助細(xì)胞的獨(dú)特子集,通常在上皮和粘膜屏障上提供抗微生物免疫。它們也與多種自身免疫疾病有關(guān)。Th17細(xì)胞的特征在于其細(xì)胞內(nèi)RORγt和STAT3的表達(dá)以及細(xì)胞因子(IL-17A,IL-17F,IL-21和IL-22)的產(chǎn)生。在人類中,可以使用CD4,CD161和CCR6的細(xì)胞表面標(biāo)記物識(shí)別它們。
Th22細(xì)胞是促炎性T輔助細(xì)胞的新子集,其正常功能尚未完全確定,盡管建議它們參與皮膚免疫。它們與多種自身免疫性疾病有關(guān),例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎,克羅恩氏病,牛皮癬和特應(yīng)性皮炎。盡管與具有細(xì)胞表面受體的Th17細(xì)胞和IL-22的產(chǎn)生表現(xiàn)出一些相似之處,但Th22細(xì)胞的特征在于其被TNF-α極化,芳基烴受體和CCR10的表達(dá)以及缺乏IL-17的產(chǎn)生。
我們常用的檢測(cè)指標(biāo):CD4、IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-17A、IL-22。
【實(shí)驗(yàn)流程】
組織:制成單細(xì)胞懸液-溶血-離心去上清-調(diào)整細(xì)胞密度-加入相應(yīng)的標(biāo)記抗體-孵育-離心去上清-上機(jī)
血液:溶血-離心去上清-調(diào)整細(xì)胞密度-加入相應(yīng)的表面標(biāo)記抗體-孵育-離心去上清-上機(jī)
案例展示
注意事項(xiàng)
血液樣本量需提供5-10ml。
送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)
樣品類型 | 樣品需求 | 運(yùn)輸條件 |
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組織 | 離體后組織制成單細(xì)胞懸液,加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
活細(xì)胞 | 樣本量:1*106個(gè)細(xì)胞/TEST,加入PBS培養(yǎng)基內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |
血液 | 將血液采集在EDTA肝素鈉的抗凝采血管內(nèi) | 常溫運(yùn)輸 |