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免疫表型

免疫表型分析可以作為鑒別各種白血病和淋巴瘤的實驗手段,輔助臨床評估療效和預(yù)后。不是所有的細(xì)胞都能通過免疫表型來判定,只有有特異表型標(biāo)志的細(xì)胞才能通過表型來判斷。

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實驗介紹

【應(yīng)用簡介】

免疫表型分析可以作為鑒別各種白血病和淋巴瘤的實驗手段,輔助臨床評估療效和預(yù)后。不是所有的細(xì)胞都能通過免疫表型來判定,只有有特異表型標(biāo)志的細(xì)胞才能通過表型來判斷。


【免疫表型】

免疫表型是通常所說的白細(xì)胞分化標(biāo)志,即CD加上數(shù)字,現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)300多種白細(xì)胞分化標(biāo)志。因為細(xì)胞不同,所以每個細(xì)胞的標(biāo)志也會不同,就像不同的人有不同的面孔一樣。不同的免疫細(xì)胞表面有大量的抗原,可以作為不同分化階段免疫細(xì)胞的表面標(biāo)志物。

淋巴細(xì)胞亞群分析是檢測細(xì)胞免疫和體液免疫功能的重要指標(biāo),它總體反應(yīng)機(jī)體當(dāng)前的免疫免疫功能、狀態(tài)和平衡水平,并可以輔助診斷某些疾病,如自身免疫病、免疫缺陷病、惡性腫瘤、血液病、變態(tài)反應(yīng)性疾病等,分析發(fā)病機(jī)制,觀察療效及檢測預(yù)后有重要意義。


【實驗方法】

1、取20ul單克隆抗體與100μl抗凝血,共同混合置室溫20 min;

2、加溶血素1500μI,置室溫避光15 min,2500 r/min離心5 min;

3、棄上清,加1500μI PBS,混勻,2500 r/min離心5 min;

4、同上操作1次,上儀器檢測:以CD45-PerCP/SSC設(shè)門,觀察每群細(xì)胞免疫表型。

案例展示


6.jpg


圖 1. 淋巴細(xì)胞亞群的免疫表型

技術(shù)總結(jié)

1、標(biāo)本最好用EDTA抗凝,其次用肝素;

2、標(biāo)本要新鮮采集,不能發(fā)生凝血;

3、制備細(xì)胞懸液時,使用標(biāo)準(zhǔn)溶血劑以使紅細(xì)胞充分溶解;

4、標(biāo)記后的細(xì)胞應(yīng)盡快上機(jī)檢測,最遲不能超過72h。

送檢與交付標(biāo)準(zhǔn)

樣品類型樣品需求保存條件運輸條件備注
凍存細(xì)胞

1.取對數(shù)生長期的細(xì)胞,消化離心收集細(xì)胞,加入凍存液吹打混勻,裝入凍存管,標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù),凍存細(xì)胞數(shù)量在1-5*106個/ml。

2.項目啟動后細(xì)胞復(fù)蘇,復(fù)蘇后3天反饋細(xì)胞狀態(tài),3-5天反饋細(xì)胞污染情況,5-7天反饋支原體污染情況。

3. 細(xì)胞詳細(xì)信息(名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等,如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息)

液氮干冰所有樣本均須有唯一標(biāo)記,且標(biāo)記清晰可識
復(fù)蘇后細(xì)胞

1.使用T25培養(yǎng)瓶運輸。細(xì)胞匯合度達(dá)到60%以上,裝滿培養(yǎng)液,只留紐扣大小的氣泡,瓶口用封口膜封好,標(biāo)明細(xì)胞名稱/細(xì)胞代數(shù)/接種時間/培養(yǎng)基類型,瓶子固定運輸。

2.收到細(xì)胞后3天反饋細(xì)胞狀態(tài),3-5天反饋細(xì)胞污染情況,5-7天反饋支原體污染情況。

3. 細(xì)胞詳細(xì)信息(名稱、培養(yǎng)基和其他培養(yǎng)條件等,如經(jīng)過特別處理需告知并提供必要的信息)

常溫常溫
質(zhì)粒

1.純度高,無內(nèi)毒素,無蛋白質(zhì),基因組DNA/RNA污染,質(zhì)粒A260:A280的比值在1.8-2.0之間

2.濃度不低于0.5μg/μl,總量大于100μg,無內(nèi)毒素處理

3. 載體詳細(xì)信息,包括名稱、大小、抗性、熒光標(biāo)記

-20℃冰袋
病毒

1.慢病毒:滴度不低于1*108TU/ml,體積約200μl,標(biāo)明制備時間,且沒有反復(fù)凍融

2.腺病毒:滴度不低于1*109PFU/ml,體積約200μl,標(biāo)明制備時間,且沒有反復(fù)凍融

3.明確是否表達(dá)熒光標(biāo)簽蛋白及其種類,最好需要提供病毒載體圖譜;

-80℃干冰




細(xì)胞交付標(biāo)準(zhǔn).jpg