WB樣本粘稠怎么辦？
2025-02-21 14:59:27
來(lái)源/作者：普拉特澤-生物醫(yī)學(xué)整體課題外包平臺(tái)
你是否會(huì)碰到這樣的問(wèn)題：在提取WB樣本的時(shí)候，加入裂解液后，離心發(fā)現(xiàn)管內(nèi)有非常多的膠狀物質(zhì)，非常粘稠，即使多加裂解液也是無(wú)用，還會(huì)使得蛋白濃度降低。蛋白樣本若出現(xiàn)粘稠的情況，會(huì)對(duì)后續(xù)的檢測(cè)造成一定的影響，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不可靠，所以今天我們來(lái)研究一下導(dǎo)致的原因——普拉特澤生物承接WB等分子檢測(cè)相關(guān)服務(wù)上萬(wàn)例，積累了操作大量經(jīng)驗(yàn)，為大家詳細(xì)分享WB樣本粘稠問(wèn)題，同時(shí)為廣大科研工作者開(kāi)展線上的理論培訓(xùn)與線下實(shí)操，可承接wb實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)。
【一】、蛋白樣本粘稠會(huì)造成什么情況?
1.樣品洗液困難：堵塞移液器：離心后，由于樣品粘稠，膠狀物會(huì)堵塞移液器頭，導(dǎo)致移液后上清液所剩無(wú)幾；無(wú)法分離上清液：樣品太過(guò)粘稠，移液時(shí)容易整體帶出，無(wú)法有效分離上清液。
2.無(wú)法測(cè)定及定量：樣品粘稠無(wú)法成為均一液體，導(dǎo)致蛋白定量（如使用BCA法）時(shí)OD值異常，無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確的定量測(cè)定。
3.上樣困難：盡管加了loading buffer進(jìn)行煮樣，上樣樣品仍然特別粘稠，很難加入到膠孔中
電泳結(jié)果不佳：SDS-PAGE時(shí)，粘稠的樣品會(huì)卡在點(diǎn)樣孔里，導(dǎo)致條帶不成直線，有嚴(yán)重拖尾，條帶不集中
4.蛋白丟失：粘稠物包裹蛋白導(dǎo)致無(wú)法釋放，樣品很難跑出理想的結(jié)果，有時(shí)甚至是完全沒(méi)有條帶。
【二】那么是什么造成蛋白質(zhì)樣本如此粘稠的呢？
1.核酸殘團(tuán)：在細(xì)胞裂解過(guò)程中，細(xì)胞中的DNA纏繞其他大分子物質(zhì)，形成粘稠的“核酸殘團(tuán)”。這些核酸殘團(tuán)與蛋白質(zhì)聚集在一起，使得樣本變得粘稠。核酸殘團(tuán)的存在會(huì)降低蛋白提取效率，使得蛋白質(zhì)丟失。
2.細(xì)胞碎片和油脂：裂解后的樣本中可能含有細(xì)胞碎片，如油脂、難溶蛋白等。這些成分也會(huì)增加樣本的粘稠度。
【三】如何有效降低蛋白樣本的粘稠？
1.使用柱式法提取蛋白：柱式法蛋白提取通過(guò)優(yōu)化的裂解液配方和離心管柱技術(shù)，可以有效提高裂解效率，阻截核酸，減少樣本粘稠度。
2.超聲破碎：利用超聲波的能量破壞蛋白復(fù)合物，切割染色質(zhì)，改善樣本粘稠狀態(tài)。但是超聲處理可能產(chǎn)生泡沫，影響蛋白濃度測(cè)定及后續(xù)實(shí)驗(yàn)。超聲產(chǎn)生的熱量可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性或降解，因此應(yīng)避免用于磷酸化等敏感蛋白的研究。
3.使用核酸酶降解核酸：核酸酶可以降解樣本中的核酸，減少核酸殘團(tuán)的形成，從而降低樣本粘稠度。
4.延長(zhǎng)煮沸時(shí)間：在加入上樣緩沖液后，適當(dāng)延長(zhǎng)煮沸時(shí)間，可以使結(jié)合在基因組DNA上的蛋白充分釋放，同時(shí)導(dǎo)致基因組DNA的部分?jǐn)嗔眩档蜆颖菊吵矶取?/span>
5.反復(fù)抽吸：使用注射器反復(fù)抽吸樣本，可以打斷基因組DNA，改善樣本粘稠狀態(tài)。
冰凍三尺，非一日之寒，普拉特澤致力于幫助廣大科研工作者解決WB實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的各方面問(wèn)題，不但授人以魚(yú)，亦授人以漁。
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