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    雙熒光素酶報告系統(tǒng)（Dual-Luciferase Reporter Assay System）是一種在生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用的技術(shù)，也是近些年生物學(xué)研究的熱門研究工具之一。普拉特澤生物實驗室已經(jīng)承接雙熒光素酶實驗上百例；可外包更多分子檢測實驗讓我們從系統(tǒng)原理、組成、主要應(yīng)用、實驗流程、優(yōu)勢及局限性等方面進行介紹一下吧~
基本原理
熒光素酶反應(yīng)：熒光素酶是一類能夠催化熒光素發(fā)生氧化反應(yīng)并發(fā)出熒光的酶。在雙熒光素酶報告系統(tǒng)中，常用的是螢火蟲熒光素酶（Firefly Luciferase）和海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）。螢火蟲熒光素酶可以催化熒光素在 ATP、鎂離子等存在的條件下與氧氣發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生黃綠色熒光；海腎熒光素酶則催化腔腸素與氧氣反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色熒光。

報告基因的應(yīng)用：將感興趣的基因的調(diào)控元件（如啟動子、增強子等）與熒光素酶基因構(gòu)建成報告基因載體。當(dāng)這些調(diào)控元件受到細(xì)胞內(nèi)各種因素的影響時，會調(diào)控?zé)晒馑孛富虻谋磉_(dá)，進而通過檢測熒光素酶的活性來反映調(diào)控元件的活性以及相關(guān)基因的表達(dá)情況。在雙熒光素酶報告系統(tǒng)中，通常會同時使用兩種熒光素酶，一種作為實驗報告基因，另一種作為內(nèi)參報告基因，用于校正實驗誤差。

系統(tǒng)組成

報告基因載體

基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究：可以用于確定特定基因的啟動子區(qū)域中是否存在特定轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點，以及這些轉(zhuǎn)錄因子對基因轉(zhuǎn)錄的激活或抑制作用。

miRNA 功能研究：通過將 miRNA 的靶基因的 3'UTR 區(qū)域克隆到熒光素酶基因的下游，構(gòu)建報告基因載體。若 miRNA 能夠與靶基因的 3'UTR 結(jié)合，會導(dǎo)致熒光素酶基因的表達(dá)受到抑制，熒光信號減弱，從而驗證 miRNA 與靶基因的相互作用。       

藥物研發(fā)：在藥物研發(fā)過程中，可用于篩選能夠調(diào)節(jié)特定基因表達(dá)的藥物分子。也可以評估藥物對細(xì)胞信號通路的影響，為藥物的作用機制研究提供依據(jù)。
實驗流程

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：將構(gòu)建好的螢火蟲熒光素酶報告基因載體和海腎熒光素酶內(nèi)參載體共轉(zhuǎn)染到目標(biāo)細(xì)胞中?？梢允褂弥|(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑、電穿孔等方法將載體導(dǎo)入細(xì)胞。