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一、GUS染色實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理

GUS染色的實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖?span style="font-family: 微軟雅黑;">對植物樣本進(jìn)行染色，因?yàn)榻^大多數(shù)植物細(xì)胞內(nèi)不存在內(nèi)源GUS活性，因此GUS基因廣泛用作轉(zhuǎn)基因植物的報(bào)告基因。

GUS（β-glucuronidase，β-D-葡萄糖苷酸酶）基因是目前常用的一種報(bào)告基因，其表達(dá)產(chǎn)物β-葡萄糖苷酸酶是一種水解酶，能催化許多β-葡萄糖苷酯類物質(zhì)的水解，它可以將5-溴-4-氯-3-吲哚-β-葡萄糖苷酸酯（5-bromo-4-chloro-3-indolyl-glucronide，縮寫為X-Gluc）分解為藍(lán)色物質(zhì)。

二、GUS染色實(shí)驗(yàn)方法

（1）組織化學(xué)染色定位方法

（2）熒光法測定GUS活性

（3）分光光度法測定GUS活性

三、GUS染色實(shí)驗(yàn)步驟

以某植物樣本為例：

step1: 90%丙酮固定20 min;

(丙酮(acetoue)滲透力很強(qiáng)，能使蛋白質(zhì)沉淀凝固，但不影響蛋白質(zhì)的功能基團(tuán)而保存蛋白質(zhì)的活性，用于固定磷酸酶和氧化酶效果較好，因此可用于GUS染色前的固定，可防止GUS信號的擴(kuò)散。特點(diǎn)是固定快、滲透力強(qiáng)，易使組織細(xì)胞收縮；但保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)的能力欠佳。固定方法：一般4℃下20分鐘為宜。)

Step2 : 加1 mL GUS洗液洗去丙酮，洗2遍:

Step3 : 加GUS染色液，冰上抽真空15-20 min;

Step4 : 37°C放置，隔一陣觀察一下，染上色了就進(jìn)行下面步驟

Step5 : 吸出染色液，加入1 mL 70%乙醇，停止染色反應(yīng)及脫色

Step6 : 更換幾次乙醇直到脫色完全

Step7 : 解剖鏡及顯微鏡拍照觀察

載玻片上加適量HCG透明液，用鑷子取出幼苗在透明液中鋪平，蓋上蓋玻片，解剖鏡觀察整株，顯微鏡觀察細(xì)節(jié)并拍照。