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    細(xì)胞侵襲是腫瘤轉(zhuǎn)移、傷口修復(fù)等生理病理過程的核心環(huán)節(jié)普拉特澤生物為廣大生命科學(xué)研究人員提供細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)，可根據(jù)實(shí)方案的要求選擇不同的檢測方法，就跟大家一起繼續(xù)探究系統(tǒng)解析細(xì)胞侵襲檢測技術(shù)

并重點(diǎn)詳解Transwell實(shí)驗(yàn)的原理與操作步驟，助力科研工作者高效開展實(shí)驗(yàn)。

 一、細(xì)胞侵襲檢測技術(shù)分類

1. 傳統(tǒng)體外檢測方法

▲Transwell實(shí)驗(yàn)：通過聚碳酸酯膜分隔上下室，上室鋪基質(zhì)膠（如Matrigel）模擬細(xì)胞外基質(zhì)（ECM），檢測細(xì)胞降解基質(zhì)并遷移的能力。

▲Boyden小室法：類似Transwell，但采用預(yù)涂基底膜提取物（BME）的PET膜，結(jié)合熒光標(biāo)記定量分析16。

2. 高通量與實(shí)時(shí)監(jiān)測技術(shù)

●Oris?平臺：基于96孔板設(shè)計(jì)，通過實(shí)時(shí)成像分析細(xì)胞侵入無細(xì)胞區(qū)域的面積，適用于大規(guī)模篩選。

●CIM-Plate結(jié)合RTCA分析儀：利用電阻抗變化實(shí)時(shí)監(jiān)測侵襲過程，無需染色，靈敏度高。

●3D細(xì)胞培養(yǎng)模型：結(jié)合水凝膠或生物打印技術(shù)，模擬體內(nèi)微環(huán)境，更貼近生理?xiàng)l件。

二、Transwell實(shí)驗(yàn)原理與操作步驟

1. 實(shí)驗(yàn)原理

Transwell實(shí)驗(yàn)通過聚碳酸酯膜（孔徑8-12 μm）分隔上下室，上室鋪Matrigel膠模擬基底膜。細(xì)胞需分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）降解基質(zhì)
在趨化因子（如血清或纖維粘連蛋白）驅(qū)動(dòng)下穿過膜進(jìn)入下室，通過計(jì)數(shù)下室細(xì)胞評估侵襲能力。

關(guān)鍵區(qū)別：侵襲實(shí)驗(yàn)需鋪膠，而遷移實(shí)驗(yàn)無需基質(zhì)膠。

2. 操作步驟詳解

步驟：基質(zhì)膠鋪板

●Matrigel處理：提前12小時(shí)從-20℃轉(zhuǎn)移至4℃解凍，用無血清培養(yǎng)基按1:8稀釋（需預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化比例）。

●鋪膠方法：取100 μL稀釋膠液均勻涂布于Transwell膜上，37℃孵育1小時(shí)成凝膠，避免氣泡。

步驟2：細(xì)胞懸液制備

●細(xì)胞預(yù)處理：對數(shù)期細(xì)胞經(jīng)無血清培養(yǎng)基饑餓處理12-24小時(shí)，減少血清干擾。

●懸液調(diào)整：離心后以無血清培養(yǎng)基重懸，調(diào)整密度至1-10×10?/mL（具體依細(xì)胞類型優(yōu)化）。

步驟3：細(xì)胞接種與培養(yǎng)

●下室加液：加入500-650 μL含5%-10% FBS的培養(yǎng)基作為趨化源28。

●上室接種：加入100-200 μL細(xì)胞懸液，避免氣泡干擾趨化梯度，培養(yǎng)12-48小時(shí)（依細(xì)胞侵襲力調(diào)整）。

步驟4：固定與染色

去除未遷移細(xì)胞：棉簽輕柔擦拭上室表面，PBS清洗后4%多聚甲醛固定20分鐘。

染色方法：0.1%結(jié)晶紫染色5-10分鐘，PBS沖洗后顯微鏡觀察。

步驟5：結(jié)果分析

直接計(jì)數(shù)法：隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)下室細(xì)胞（適用于細(xì)胞量適中）。

間接檢測法：若細(xì)胞過多，可用醋酸脫色后測OD值（570 nm）。

三、實(shí)驗(yàn)優(yōu)化與常見問題

1. 關(guān)鍵注意事項(xiàng)

▲氣泡控制：接種時(shí)避免氣泡，否則趨化梯度失效。

▲基質(zhì)膠厚度：過薄導(dǎo)致假陽性，過厚延長實(shí)驗(yàn)時(shí)間。

▲細(xì)胞密度：過高導(dǎo)致計(jì)數(shù)困難，過低可能漏檢。

2. 常見問題與解決策略

●細(xì)胞不侵襲：

檢查MMPs表達(dá)（如MMP-2），饑餓處理增強(qiáng)侵襲性。

確認(rèn)孔徑選擇（實(shí)體瘤常用8 μm）。

●結(jié)果重復(fù)性差：

標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，預(yù)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化條件。

四、技術(shù)應(yīng)用與前沿進(jìn)展

Transwell實(shí)驗(yàn)廣泛應(yīng)用于腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究、藥物篩選（如MMP抑制劑）及免疫細(xì)胞趨化分析。近年結(jié)合人工智能圖像分析（如ImageJ自動(dòng)化）和單細(xì)胞測序，可動(dòng)態(tài)解析侵襲相關(guān)基因表達(dá)。
今天關(guān)于細(xì)胞侵襲檢測技術(shù)就分享到這兒啦~如果您在實(shí)驗(yàn)過程中遇到技術(shù)問題，或者需要實(shí)驗(yàn)外包和代做，可與我們技術(shù)老師聯(lián)系18570028002（微信同號）