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一、TTC染色實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介與原理

實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)介：TTC染色是TTC和活細(xì)胞線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶反應(yīng)，生成紅色的甲臜，用來表示細(xì)胞的活力。染色要在37°C避光條件下進(jìn)行，它是評(píng)價(jià)腦缺血損傷常用的指標(biāo)。

實(shí)驗(yàn)原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感復(fù)合物，它是呼吸鏈中吡啶—核苷結(jié)構(gòu)酶系統(tǒng)的質(zhì)子受體，與正常組織中的脫氫酶反應(yīng)而呈紅色，而缺血組織內(nèi)脫氫酶活性下降，不能反應(yīng)，故不會(huì)產(chǎn)生變化呈蒼白。

TTC染色實(shí)驗(yàn)意義：通過TTC染色觀察梗死病變及梗死體積。

二、TTC染色結(jié)果分析

動(dòng)物組織：非梗死區(qū)染為紅色，梗死區(qū)呈灰白色，紅色區(qū)與灰色區(qū)之間為缺血區(qū)。

植物樣本：活組織呈玫瑰紅色，死組織及無生命力的組織不著色。

三、TTC染色實(shí)驗(yàn)步驟（樣本與實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌襟E均有不同）

step1：取腦。可麻醉后直接取腦或經(jīng)生理鹽水灌注后取腦。因?yàn)槟X組織未用多聚甲醛固定，所以較軟，取腦時(shí)更應(yīng)仔細(xì)，保持大腦的完整性。

Step2：-20°C冰箱中速凍20分鐘左右，便于切片

Step3：切片。每隔2mm切一片，第一刀在腦前極與視交叉連線中點(diǎn)處；第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。如果需計(jì)算面積的話，應(yīng)切得均勻或用專門的腦槽。

Step4：將切片置于TTC染色液中，常規(guī)濃度為2%，也有用1%或更低濃度的。

Step5：用錫箔紙蓋住后，放入37C溫箱15～30min，不時(shí)翻動(dòng)腦片，使均勻接觸到染色液。也可以用將腦片放入多孔板，再滴入TTC，覆以圓形蓋玻片使均勻染色

Step6：將染色的腦片標(biāo)號(hào)，設(shè)定標(biāo)尺并拍照；如需計(jì)算面積或體積，需借助圖像處理軟件進(jìn)行計(jì)算

四、TTC染色常見問題分析及原因解析

1、染色過深或過淺

染色時(shí)間、分化時(shí)間過長(zhǎng)或不夠，染色過程可在鏡下控制，適當(dāng)調(diào)整時(shí)間。

2、 切片破碎

取材不當(dāng)，取腦時(shí)更應(yīng)仔細(xì)，保持大腦的完整性?；蛩賰鰰r(shí)間不夠，切片時(shí)組織過軟，適當(dāng)延長(zhǎng)冷凍時(shí)間。