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   大家好呀，前面給大家分享了Co-IP實驗的原理、步驟和注意事項，今天咱們來學習的就是Co-IP實驗過程和結果中容易出現(xiàn)的問題以及解決方法。本文由普拉特澤生物分子檢測中心的技術小哥哥小姐姐們經(jīng)過大量實操經(jīng)驗總結而來，不聽錯過一個億哦。普拉特澤生物專業(yè)承接包括Co-IP代做等各種分子檢測實驗外包服務，服務快周期短，來pick一下我吧。

   鏈接奉上，大家自行復習哦?。?br/>

   《Co-IP免疫共沉淀實驗——原理介紹》
   《Co-IP免疫共沉淀實驗——操作步驟》
   《Co-IP免疫共沉淀實驗——注意事項》

   Co-IP免疫共沉淀常見問題及解決方法：
   一、實驗結果高背景

   原因1：制備樣品中可能有不完全溶解的大的蛋白復合體

   制備樣品后進行短暫超聲處理（3次，每次5秒鐘），然后離心純化，取上清后進行后續(xù)實驗

   原因2：洗滌不徹底

   多次洗滌，并逐漸增加洗滌緩沖液中的NaCl和去垢劑濃度

   原因3：非特異性蛋白吸附于珠子上

   進行Preclearing以排除非特異性吸附

   原因4：抗體本身特異性不好

   選擇合適的抗體，可以考慮單抗

   原因5：使用了太多的抗體

   進行條件優(yōu)化減少抗體

   原因6：使用了過多的細胞或組織進行裂解

   減少樣本量，我們推薦100-500μg細胞裂解物

   原因7：抗原降解

   保證樣品中加入了蛋白酶/磷酸酶抑制劑，盡量使用新鮮制備的樣品

   原因8：WB步驟出現(xiàn)錯誤或不規(guī)范

   使用規(guī)范的WB,注意封閉、一二抗稀釋的條件

   二、無信號

   原因1：目的蛋白在樣本中表達量低或者不表達

   首先對目的蛋白表達量進行檢測，或者加大IP中加入的蛋白裂解物并進行預處理。

   胞內(nèi)蛋白互作的水平較低或沒有互作，增加蛋白裂解物或進行誘導處理。

   原因2：細胞裂解液使用不當

   根據(jù)實驗需要選擇，慎重考慮。

   原因3：目的蛋白未被洗脫

   保證使用合適的洗脫液，保證洗脫液的強度和pH值合適。

   原因4：抗體沒有很好的與珠子相互結合

   選擇合適的珠子。

   原因5：抗體選擇不當或者不工作

   利用WB對抗體進行驗證

   原因6：抗體使用不足

   查閱文獻或者說明書，并多次優(yōu)化或選擇合適的抗體使用量。
   那么關于Co-IP實驗操作過程和結果常見的問題以及解決方法我們就介紹完啦，想學習詳細Co-IP免疫共沉淀實驗的操作過程的同學歡迎點擊：《Co-IP 理論+實操》詳細學習哦！