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QPCR原理和主要的三個步驟

2024-01-09 17:37:18

來源/作者:普拉特澤-生物醫(yī)學整體課題外包平臺

  QPCR原理和主要的三個步驟由普拉特澤生物為大家總結分享,普拉特澤生物表達檢測實驗平臺專業(yè)承接實時熒光定量PCR實驗外包、Western blot 蛋白質免疫印跡等實驗代做服務,積累專業(yè)豐富的實驗操作經(jīng)驗。之前我們分享《QPCR檢測實驗詳細的步驟與報告》,這期給大家出一期總結,主要是關于QPCR原理和主要的三個步驟總結,快點學起來吧!

一、QPCR原理

QPCR,即實時熒光定量PCR,是一種在DNA擴增過程中通過熒光信號進行實時監(jiān)測的技術。其原理基于DNA雙鏈復制過程中,每復制一次,就會有一個熒光分子被標記到新生成的DNA鏈上,通過檢測熒光信號的累積,可以實時監(jiān)測DNA的擴增過程。

二、QPCR的主要步驟

①樣品制備:此步驟是進行QPCR實驗的第一步,包括從生物樣本中提取出DNA或RNA,并將其轉化為適合PCR擴增的形式。這個過程通常包括細胞裂解、核酸提取和純化等步驟。

②PCR擴增:在完成樣品制備后,將DNA或RNA模板與引物和dNTPs混合,并在特定溫度下進行擴增。在這個過程中,引物與模板DNA特異性結合,并在DNA聚合酶的作用下延伸,生成新的DNA鏈。這個過程會重復多次(通常是30-40次),以獲得足夠的DNA供后續(xù)分析。


③熒光檢測:在PCR擴增過程中,每次DNA合成會產(chǎn)生一個熒光分子,這些熒光分子會被檢測系統(tǒng)捕獲并轉化為電信號。這個電信號隨后被轉化為可以測量的數(shù)據(jù),如CT值(閾值循環(huán)數(shù))。通過比較不同樣品在相同循環(huán)數(shù)下的熒光強度,可以確定樣品中目標分子的相對數(shù)量。

通過以上三個步驟,qPCR技術能夠在短時間內實現(xiàn)目標分子的高靈敏度、高特異性和實時監(jiān)測。這種技術廣泛應用于基因表達分析、突變檢測、病原體定量以及基因組學和表觀遺傳學研究中。

好,今天關于QPCR

原理和主要的三個步驟

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